Skillnad mellan nitrocellulosa och PVDF | Nitrocellulosa vs PVDF

Huvudskillnad - Nitrocellulosa vs PVDF

Western blotting är en metod som medger detektion och kvantifiering av specifika proteiner från ett proteinprov. Teknikens tillförlitlighet beror på valet av ett korrekt membran för absorption av proteiner från gelén. Det finns olika typer av mikroporösa membran. Nitrocellulosa och PVDF-membran är två sådana membraner som föredrages av forskarna på grund av deras speciella egenskaper över de andra typerna av membran. Urvalet mellan nitrocellulosa eller PVDF är också en annan utmaning vid western blotting. Både nitrocellulosa och PVDF har en hög proteinabsorptionskapacitet. Nyckelförskjutningen mellan nitrocellulosa och PVDF-membran är att nitrocellulosemembran inte har förmåga att avlägsna antikroppar och återanvända membranet för antikroppsreprovering medan PVDF-membran har strippnings- och återanvändningsförmåga .

INNEHÅLL

1. Översikt och nyckelfaktor

2. Vad är Nitrocellulosa

3. Vad är PVDF

4. Jämförelse vid sida vid sida - Nitrocellulosa vs PVDF

5. Sammanfattning

Vad är Nitrocellulosa?

Nitrocellulosa är en polymer som tillverkas genom att behandla cellulosa med salpetersyra och används för att tillverka mikroporösa membran i molekylärbiologi, speciellt för blottingstekniker såsom sydlig, nordlig och western blotting. Porstorlekarna av nitrocellulosemembran sträcker sig från 3 till 20 pm. Nitrocellulosa mikroporösa membran underlättar detektering av immunokemisk reaktion som sker på membranets yta. Därför används nitrocellulosamembran ofta för immobilisering av proteiner och detektion av specifika proteiner i western blotting. Nitrocellulosa membran kan också immobilisera glykoproteiner och nukleinsyror.

Nitrocellulosamembran är föredragna vid sidoflödesanalyser på grund av flera egenskaper. Nitrocellulosa membraner absorberar proteiner vid hög koncentration. Lösningsmedlet som användes för att blöta membranet minskar inte nitrocellulosemembranproteinabsorptionen. Nitrocellulosa membraner kan lätt skäras till önskad gelstorlek och överföra proteiner från gelén till membranet genom elektrisk eller kapillär överföring. Nitrocellulosa möjliggör snabbare flöde av proteiner genom membranet med hög bindningspotential. Nitrocellulosa visar en förbättrad styrhantering. Ett annat speciellt attribut av nitrocellulosamembran är att det lätt kan limmas med vattenlösliga klister som inte är lösningsmedel på olika plastunderlag.

Figur 01: Nitrocellulosamembran för western blotting

Vad är PVDF?

Polyvinyliden-difluorid (PVDF) är fluorpolymer framställd genom polymerisation av vinyliden-difluorid och har en hög immobiliseringsförmåga hos proteiner. Därför används mikroporösa membran framställda av PVDF i western blottingstekniker för att analysera specifika proteiner från blandningarna av proteiner. PVDF-membran kan också användas för aminosyraanalys och proteinsekvensering. Den viktigaste egenskapen hos PVDF-membranet över nitrocellulosamembran är att det lätt kan avlägsnas från antikropparna och återanvändas för efterföljande antikroppsprober.

PVDF-membran är tjockare än nitrocellulosamembran; därmed mer resistenta mot skador vid återanvändning. PVDF-membran är mycket hydrofoba. Därför måste de blötläggas i metanol eller isopropanol före användning.

Vad är skillnaden mellan nitrocellulosa och PVDF?

- diff Artikel Middle before Table ->

Nitrocellulosa vs PVDF
Nitrocellulosa är en polymer bestående av cellulosa.	PVDF är en fluorpolymer framställd genom polymerisation av vinyliden-difluorid.
Membranporstorlek
Typiska porstorlekar är 0. 1, 0. 2 eller 0. 45μ	Typiska porstorlekar är 0. 1, 0. 2 eller 0. 45μm
Proteinbindande kapacitet Nitrocellulosa har en proteinbindningskapacitet på 80 till 100 μg / cm
2 . PVDF har en proteinbindande kapacitet av 170 till 200 | ig / cm	2 . Känslighet
Detta har låg känslighet jämfört med PVDF.
Detta har en hög känslighet.	Detektion av lågpräglade proteiner
Eftersom känsligheten är låg i nitrocellulosemembran är den inte lämplig för detektering av lågt uttryckta proteiner.
Detta är mer lämpligt för detektering av lågt uttryckta proteiner på grund av dess höga känslighet.	Bakgrundsstörning
Detta har lägre bakgrundsbrus
Detta har högre bakgrundsbrus.	Interaktioner med proteiner
Proteinmolekyler binder till nitrocellulosamembraner genom hydrofoba interaktioner.
Proteiner binder till PVDF-membran genom hydrofoba och dipol-interaktioner.	Membranets natur
Nitrocellulosa är skört och bräckligt. Men versioner av nitrocellulosa är tillgängliga, och de är resistenta.
PVDF är mer hållbart och har högre kemikalieresistens.	Möjlighet att remsa och återanvända
Nitrocellulosa kan ha svårigheter att strippa och reprobera utan att förlora signalen.
PVDF är idealisk för reprobing och sequencing applikationer.	Lämplighet
Nitrocellulosa är idealisk för att detektera proteiner med låg molekylvikt.
PVDF är mer lämpligt för att detektera proteiner med hög molekylvikt.	Andra användningsområden
Nitrocellulosa kan användas för nukleinsyraanalys och punkt- / spaltning.
PVDF kan användas för proteinsekvensering och fastfas-analyssystem.	Kostnad
Detta är billigare än PVDF-membran.
Detta är dyrare än nitrocellulosamembran.	Behov för förtvättning
Nitrocellulosemembran kräver inte förbehandling med metanol
PVDF-membran kräver förbehandling med metanol.	Sammanfattning - Nitrocellulosa vs PVDF

Nitrocellulosa membraner var de första membran som användes kommersiellt för sidoflödesanalys. De har en hög kapacitet för att absorbera proteiner. Därför används nitrocellulosamembran i western blotting. PVDF är en annan typ av membran som används i western blotting och det har också en hög proteinabsorptionskapacitet. Båda typerna används i western blotting för proteinanalys. Emellertid har PVDF-membran mer speciella egenskaper, vilket gör dem mer lämpliga än nitrocellulosemembran för western blotting. Men nitrocellulosamembran är mer lämpliga för detektering av proteiner med låg molekylvikt, PVDF-membran är mer lämpliga för detektering av proteiner med hög molekylvikt. Detta är skillnaden mellan nitrocellulosa och PVDF membran.

Image Courtesy:

1. "Western blot transfer" Av Bensaccount på English Wikipedia (CC BY 3. 0) via Commons Wikimedia

Referens:

1. Luque-Garcia, Jose L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun och Thomas A. Neubert. "Användning av nitrocellulosamembran för proteinkarakterisering genom matrisassisterad laserdesorption / joniseringsmasspektrometri. " Analytisk kemi. U. S. National Library of Medicine, 15 juli 2006. Web. 28 mars 2017

2. "Molekylär markörer och växtbioteknik. "Google Böcker. N. p., n. d. Webb. 28 mars 2017

3. Måndag den 8 april 2013 Tweet. "The Magic's In Membrane: Välj klokt för Best Western Blot Resultat. "Biocompare. N. p., 08 april 2013. Web. 28 mars 2017